本文標題："芽胞染色使用的菌種需要注意菌齡"
發布者：yiyi ------ 分類: 站內動態 ------ 人瀏覽過 -----時間：2012-12-11 17:33:31
莢膜染色法
目的
原理
材料與儀器
步驟與方法
實驗注意事項
實驗結果
目的
內孢子為某些革蘭氏陽性菌為適應外在惡劣環境時所產生的一種結構，可在細菌鑑別中當作一種分類上的依據。本實驗旨在教導學生瞭解內孢子染色之原理，
并學習其染色法，以區別細菌內孢子與生長細胞有何不同之處。
原理
使用初染劑－孔雀石綠，在加熱條件下進行染色，使染料不僅進入菌體也可進入內孢子。接著將進入菌體的染料經水洗使其脫色，
而內孢子經染色后因難以被水洗去，故再用複染劑染色后，內孢子仍會保留初染劑的顏色，而菌體則會被染成複染劑的顏色，使內孢子和菌體易區分。
材料與儀器
菌種
染劑
設備儀器及其他用具材
菌種
培養48小時之Bacillus subtilis
染劑
5%孔雀石綠
0.5%番紅
設備儀器及其他用具材
酒精燈
接種環
玻片
濾紙
步驟與方法
此染色方法之操作流程如下：
制備樣本玻片：準備一乾淨之玻片，先滴入1~2滴蒸餾水于戴玻片上，接著使用經火滅菌并冷卻之接種環將培養48小時之Bacillus subtilis菌種液取出，并與其充分混合后，制備成樣本玻片，并短時間在酒精燈上火烤加熱固定。
初染：將樣本玻片滴上孔雀石綠染劑并使其完全覆蓋于玻片標本上，接著將玻片以酒精燈火烤方式，再加熱數分鐘。加熱過程中應輕輕搖晃玻片樣本，為避免使孔雀石綠染劑蒸乾，亦可適時補充染劑（圖5-1(A)）。
脫色：將加熱過后之玻片置于室溫中冷卻后，以蒸餾水清洗掉多馀的染劑
複染：滴上番紅染劑進行複染，約30秒
水洗：再以蒸餾水輕輕沖洗掉多馀的染劑
顯微鏡觀察：將玻片風乾或以濾紙輕輕擦乾水分后，于顯微鏡觀察細菌中內孢子型態。
實驗注意事項
芽胞染色使用之菌種應注意菌齡。
欲制備出好的玻片，在取菌時，應用接種環先充分攪拌，然后再挑取菌液，否則菌體沈淀于管底導致涂抹時菌體太少。
染色過程中，可用玻片夾夾住載玻片邊緣，以避免手指被染劑沾染。
實驗結果
請畫出Bacillus subtilis經染色后所呈現之型態，并描繪內孢子于細菌中生長之位置與形狀。
預期結果：芽胞應呈藍綠色，菌體則為紅色。
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